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更新時間：2010-11-26 點擊：971
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人類免疫缺陷病毒（HIV），導(dǎo)致獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）即艾滋病的產(chǎn)生，zui早于1984在美國明確發(fā)現(xiàn)。到2002年6月底已有6000萬人感染了HIV，其中2000萬人已被艾滋病奪去生命，艾滋病正已每天1.4萬人受感染的速度擴大流行，目前該病尚無法治愈，也無有效疫苗。
截止到2003底我國HIV感染者已近84萬，進入了快速增長期，據(jù)有關(guān)專家估計，如不采取積極有效的控制措施，到2010年我國HIV感染者將達1000萬，形勢十分嚴峻。HIV感染的診斷是艾滋病預(yù)防控制工作的重要組成部分，只有發(fā)現(xiàn)傳染源才能更有效地控制艾滋病傳播。
通過檢測HIV的特異性抗體、抗原、核酸或病毒分離培養(yǎng)可確立HIV感染，WHO和我國衛(wèi)生部推薦使用的HIV感染診斷方法是血清學抗體檢測。
一、HIV檢測的特殊性HIV檢測不同于其他病原微生物檢測，要求十分嚴格，任何錯誤的診斷，包括假陽性或假陰性，都會對被檢者產(chǎn)生十分重要的影響。因此，HIV檢測必須嚴格按照國家制定的《艾滋病檢測工作管理辦法》和《艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（以下簡稱《規(guī)范》）進行，檢測的實驗室須經(jīng)當?shù)匦l(wèi)生行政部門審批合格，從事艾滋病檢測工作的技術(shù)人員須接受專門的技術(shù)培訓，并獲合格證書，診斷試劑應(yīng)選擇高敏感和高特異的，篩查呈陽性反應(yīng)的需用特異性更強的方法（如：免疫印跡試驗）進行確認，整個實驗過程應(yīng)有嚴格的質(zhì)量保證體系。
二、HIV抗體檢測目前國外用于HIV抗體篩查的方法很多，根據(jù)檢測原理不同分為酶聯(lián)免疫吸附法、凝集法和層析法，可對血液、唾液和尿液標本進行常規(guī)或快速檢測。在實際工作中常用的有酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、明膠凝集試驗和各種快速診斷試劑。電泳試劑
自1985年*代ELISA試劑問世以來，隨著醫(yī)學技術(shù)的飛速發(fā)展，包被抗原已從一代的全病毒裂解物發(fā)展為目前以基因重組和多肽抗原包被和標記、有著良好敏感性和特異性的三代雙抗原夾心試劑，檢測亞型包括HIV-1、HIV-2和HIV-1型的O亞型，窗口期由10周縮短至3-4周。為避免窗口期傳染，荷蘭、法國等國已研制出第四代以重組的多肽抗原和抗P24抗體包被的雙抗原夾心法試劑盒，可同時檢測抗原抗體，使窗口期縮短了2-3周，但其臨床價值有待評估。
按《規(guī)范》要求，我國采供血機構(gòu)進行血液篩查和各醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)常規(guī)篩查檢測宜采用ELISA法，自采自供血的單位必須進行HIV抗體檢測，在尚未建立艾滋病篩查實驗室的偏遠地區(qū)或大醫(yī)院急診手術(shù)前可由經(jīng)過培訓的技術(shù)人員在規(guī)定的場所用快速試劑進行血液篩選。對用ELISA試劑或快速診斷試劑進行的篩查實驗如呈陰性反應(yīng)，即報告HIV抗體陰性；對呈陽性反應(yīng)的標本，篩查實驗室應(yīng)用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑進行重復(fù)檢測，如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，染料則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認實驗室進行確認。
篩查試劑必須是HIV-1/2混合型、經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局（SDA）注冊批準、批批檢合格、臨床評估質(zhì)量優(yōu)良、在有效期內(nèi)的試劑。HIV抗體篩查呈陽性反應(yīng)的標本由于存在假陽性的可能，必須做確認試驗。上有3種確認試驗方法，包括免疫印跡試驗、條帶免疫試驗及免疫熒光試驗，目前以免疫印跡試驗zui為常用。確認試劑必須經(jīng)SDA注冊批準。免疫印跡試劑有HIV-1/2混合型和單一型，按《規(guī)范》要求，一般先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測，根據(jù)《規(guī)范》中判定免疫印跡試驗結(jié)果的基本原則并參照所用試劑說明書綜合判定，無HIV抗體特異帶出現(xiàn)的報告HIV抗體陰性；出現(xiàn)HIV抗體特異帶，符合HIV-1抗體陽性判定標準，則報告HIV-1抗體陽性。如出現(xiàn)HIV-2型的特異性條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做單一的HIV-2型抗體確認試驗，呈陰性反應(yīng)，報告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應(yīng)的則報告HIV-2抗體血清學陽性，如需鑒別應(yīng)進行核酸序列分析。如果出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但帶型不足以判定為陽性，則判為HIV抗體不確定。
對HIV抗體不確定者應(yīng)按《規(guī)范》要求進行隨訪，必要時可做HIV-1P24抗原或核酸測定，但檢測結(jié)果只能作為輔助診斷依據(jù)，確認報告要依據(jù)血清學隨訪結(jié)果。由于目前唾液檢測試劑的敏感性和尿液檢測試劑的特異性明顯低于血液檢測試劑，故我國SDA已注冊批準的HIV抗體篩查和確認試劑只能用于血液標本檢測。
三、HIV抗體檢測的質(zhì)量控制在所有實驗中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)，每次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是由實驗室設(shè)置的弱陽性對照，一般以該試劑盒臨界值（Cutoff）的2-3倍為宜。該血清可到專門單位購買，也可由實驗室自己制備。
制備方法是：收集HIV抗體陽性和陰性血清，56℃30min滅活，3000rpm離心15min，弱陽性對照可以用HIV抗體陰性的健康人血清梯度稀釋HIV抗體強陽性血清、或用試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清混合并標定后得到，一般按一年使用量配制，用0.2μm濾膜過濾除菌，按一周實驗用量分裝、分類、標記并封口，-20℃凍存。該血清不可反復(fù)凍融，融化后應(yīng)存放2-8℃，一周內(nèi)使用。原則上每次實驗必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控本次實驗的重復(fù)性和穩(wěn)定性，同時了解各批試劑盒的批間差異，繪制質(zhì)量控制圖。
四、HIV-1P24抗原檢測HIV感染人體后有一段窗口期，在這段時期病毒抗體不能被檢出，但可以檢測到病毒相關(guān)抗原或分離病毒。故在窗口期檢測抗原是早期輔助診斷和縮短窗口期的一種方法，在感染早期和發(fā)病期抗原檢出率相對較高。HIV-1P24抗原檢測還適用于：HIV-1陽性母親所生嬰兒的早期輔助鑒別診斷；第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測呈陽性反應(yīng)、但HIV-1抗體確認陰性者的輔助診斷；監(jiān)測病程進展和抗病毒治療效果。P24抗原檢測一般用ELISA雙抗體夾心法試劑，必須經(jīng)過SDA批準注冊。
HIV-1P24抗原的陽性結(jié)果必須經(jīng)過中和試驗確認,該結(jié)果僅作為HIV感染的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診；HIV-1P24抗原檢測陰性只表示在本試驗中無反應(yīng)，不能排除HIV感染。
五、HIV核酸檢測HIV核酸檢測，通常是檢測HIVRNA，以前只能定性檢測血液中是否存在病毒核酸，而目前的技術(shù)可定量檢測血液中病毒復(fù)制水平。HIV核酸定性檢測可用于HIV感染的輔助診斷，如窗口期輔助診斷、病程監(jiān)控、指導(dǎo)治療方案及療效測定、預(yù)測疾病進程等。通常使用PCR或RT-PCR技術(shù)，使用分子生物學實驗室通用的擴增試劑，引物可來自文獻或自行設(shè)計，應(yīng)盡量覆蓋所有或常見的毒株，也可使用復(fù)合引物。
HIV核酸定量檢測多用于監(jiān)測HIV感染者的病程進展和抗病毒治療效果，目前常用的測定方法有逆轉(zhuǎn)錄PCR實驗（RT-PCR）、核酸序列擴增實驗（NASBA）、分支DNA雜交實驗（bDNA）等。在不同HIV定量檢測方法的選擇中，由于目前用于統(tǒng)一不同定量方法檢測值的標準品尚未問世，因此不同定量方法結(jié)果之間還無法直接進行比較，建議同一病人治療前后用同一方法進行HIV定量檢測。
值得注意的是，HIV核酸定性檢測陰性，只可報告本次實驗結(jié)果陰性，但不能排除HIV感染；HIV核酸檢測陽性，可作為診斷HIV感染的輔助指標，不能單獨用于HIV感染的診斷，報告定性檢測結(jié)果時還應(yīng)注明反應(yīng)條件和所使用的引物序列。報告HIV核酸定量檢測結(jié)果時應(yīng)按照儀器讀數(shù)報告結(jié)果，注明使用的試驗方法、樣品種類和樣品量，當測定結(jié)果小于zui低檢測*，應(yīng)注明zui低檢測限水平，低于zui低檢測限的結(jié)果不能排除HIV感染。biomiga分子生物試劉盒
人類免疫缺陷病毒（HIV），導(dǎo)致獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）即艾滋病的產(chǎn)生，zui早于1984在美國明確發(fā)現(xiàn)。到2002年6月底已有6000萬人感染了HIV，其中2000萬人已被艾滋病奪去生命，艾滋病正已每天1.4萬人受感染的速度擴大流行，目前該病尚無法治愈，也無有效疫苗。
截止到2003底我國HIV感染者已近84萬，進入了快速增長期，據(jù)有關(guān)專家估計，如不采取積極有效的控制措施，到2010年我國HIV感染者將達1000萬，形勢十分嚴峻。HIV感染的診斷是艾滋病預(yù)防控制工作的重要組成部分，只有發(fā)現(xiàn)傳染源才能更有效地控制艾滋病傳播。
通過檢測HIV的特異性抗體、抗原、核酸或病毒分離培養(yǎng)可確立HIV感染，WHO和我國衛(wèi)生部推薦使用的HIV感染診斷方法是血清學抗體檢測。
一、HIV檢測的特殊性HIV檢測不同于其他病原微生物檢測，要求十分嚴格，任何錯誤的診斷，包括假陽性或假陰性，都會對被檢者產(chǎn)生十分重要的影響。因此，HIV檢測必須嚴格按照國家制定的《艾滋病檢測工作管理辦法》和《艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（以下簡稱《規(guī)范》）進行，檢測的實驗室須經(jīng)當?shù)匦l(wèi)生行政部門審批合格，從事艾滋病檢測工作的技術(shù)人員須接受專門的技術(shù)培訓，并獲合格證書，診斷試劑應(yīng)選擇高敏感和高特異的，篩查呈陽性反應(yīng)的需用特異性更強的方法（如：免疫印跡試驗）進行確認，整個實驗過程應(yīng)有嚴格的質(zhì)量保證體系。
二、HIV抗體檢測目前國外用于HIV抗體篩查的方法很多，根據(jù)檢測原理不同分為酶聯(lián)免疫吸附法、凝集法和層析法，可對血液、唾液和尿液標本進行常規(guī)或快速檢測。在實際工作中常用的有酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、明膠凝集試驗和各種快速診斷試劑。電泳試劑
自1985年*代ELISA試劑問世以來，隨著醫(yī)學技術(shù)的飛速發(fā)展，包被抗原已從一代的全病毒裂解物發(fā)展為目前以基因重組和多肽抗原包被和標記、有著良好敏感性和特異性的三代雙抗原夾心試劑，檢測亞型包括HIV-1、HIV-2和HIV-1型的O亞型，窗口期由10周縮短至3-4周。為避免窗口期傳染，荷蘭、法國等國已研制出第四代以重組的多肽抗原和抗P24抗體包被的雙抗原夾心法試劑盒，可同時檢測抗原抗體，使窗口期縮短了2-3周，但其臨床價值有待評估。
按《規(guī)范》要求，我國采供血機構(gòu)進行血液篩查和各醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)常規(guī)篩查檢測宜采用ELISA法，自采自供血的單位必須進行HIV抗體檢測，在尚未建立艾滋病篩查實驗室的偏遠地區(qū)或大醫(yī)院急診手術(shù)前可由經(jīng)過培訓的技術(shù)人員在規(guī)定的場所用快速試劑進行血液篩選。對用ELISA試劑或快速診斷試劑進行的篩查實驗如呈陰性反應(yīng)，即報告HIV抗體陰性；對呈陽性反應(yīng)的標本，篩查實驗室應(yīng)用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑進行重復(fù)檢測，如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，染料則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認實驗室進行確認。
篩查試劑必須是HIV-1/2混合型、經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局（SDA）注冊批準、批批檢合格、臨床評估質(zhì)量優(yōu)良、在有效期內(nèi)的試劑。HIV抗體篩查呈陽性反應(yīng)的標本由于存在假陽性的可能，必須做確認試驗。上有3種確認試驗方法，包括免疫印跡試驗、條帶免疫試驗及免疫熒光試驗，目前以免疫印跡試驗zui為常用。確認試劑必須經(jīng)SDA注冊批準。免疫印跡試劑有HIV-1/2混合型和單一型，按《規(guī)范》要求，一般先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測，根據(jù)《規(guī)范》中判定免疫印跡試驗結(jié)果的基本原則并參照所用試劑說明書綜合判定，無HIV抗體特異帶出現(xiàn)的報告HIV抗體陰性；出現(xiàn)HIV抗體特異帶，符合HIV-1抗體陽性判定標準，則報告HIV-1抗體陽性。如出現(xiàn)HIV-2型的特異性條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做單一的HIV-2型抗體確認試驗，呈陰性反應(yīng)，報告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應(yīng)的則報告HIV-2抗體血清學陽性，如需鑒別應(yīng)進行核酸序列分析。如果出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但帶型不足以判定為陽性，則判為HIV抗體不確定。
對HIV抗體不確定者應(yīng)按《規(guī)范》要求進行隨訪，必要時可做HIV-1P24抗原或核酸測定，但檢測結(jié)果只能作為輔助診斷依據(jù)，確認報告要依據(jù)血清學隨訪結(jié)果。由于目前唾液檢測試劑的敏感性和尿液檢測試劑的特異性明顯低于血液檢測試劑，故我國SDA已注冊批準的HIV抗體篩查和確認試劑只能用于血液標本檢測。
三、HIV抗體檢測的質(zhì)量控制在所有實驗中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)，每次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是由實驗室設(shè)置的弱陽性對照，一般以該試劑盒臨界值（Cutoff）的2-3倍為宜。該血清可到專門單位購買，也可由實驗室自己制備。
制備方法是：收集HIV抗體陽性和陰性血清，56℃30min滅活，3000rpm離心15min，弱陽性對照可以用HIV抗體陰性的健康人血清梯度稀釋HIV抗體強陽性血清、或用試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清混合并標定后得到，一般按一年使用量配制，用0.2μm濾膜過濾除菌，按一周實驗用量分裝、分類、標記并封口，-20℃凍存。該血清不可反復(fù)凍融，融化后應(yīng)存放2-8℃，一周內(nèi)使用。原則上每次實驗必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控本次實驗的重復(fù)性和穩(wěn)定性，同時了解各批試劑盒的批間差異，繪制質(zhì)量控制圖。
四、HIV-1P24抗原檢測HIV感染人體后有一段窗口期，在這段時期病毒抗體不能被檢出，但可以檢測到病毒相關(guān)抗原或分離病毒。故在窗口期檢測抗原是早期輔助診斷和縮短窗口期的一種方法，在感染早期和發(fā)病期抗原檢出率相對較高。HIV-1P24抗原檢測還適用于：HIV-1陽性母親所生嬰兒的早期輔助鑒別診斷；第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測呈陽性反應(yīng)、但HIV-1抗體確認陰性者的輔助診斷；監(jiān)測病程進展和抗病毒治療效果。P24抗原檢測一般用ELISA雙抗體夾心法試劑，必須經(jīng)過SDA批準注冊。
HIV-1P24抗原的陽性結(jié)果必須經(jīng)過中和試驗確認,該結(jié)果僅作為HIV感染的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診；HIV-1P24抗原檢測陰性只表示在本試驗中無反應(yīng)，不能排除HIV感染。
五、HIV核酸檢測HIV核酸檢測，通常是檢測HIVRNA，以前只能定性檢測血液中是否存在病毒核酸，而目前的技術(shù)可定量檢測血液中病毒復(fù)制水平。HIV核酸定性檢測可用于HIV感染的輔助診斷，如窗口期輔助診斷、病程監(jiān)控、指導(dǎo)治療方案及療效測定、預(yù)測疾病進程等。通常使用PCR或RT-PCR技術(shù)，使用分子生物學實驗室通用的擴增試劑，引物可來自文獻或自行設(shè)計，應(yīng)盡量覆蓋所有或常見的毒株，也可使用復(fù)合引物。
HIV核酸定量檢測多用于監(jiān)測HIV感染者的病程進展和抗病毒治療效果，目前常用的測定方法有逆轉(zhuǎn)錄PCR實驗（RT-PCR）、核酸序列擴增實驗（NASBA）、分支DNA雜交實驗（bDNA）等。在不同HIV定量檢測方法的選擇中，由于目前用于統(tǒng)一不同定量方法檢測值的標準品尚未問世，因此不同定量方法結(jié)果之間還無法直接進行比較，建議同一病人治療前后用同一方法進行HIV定量檢測。
值得注意的是，HIV核酸定性檢測陰性，只可報告本次實驗結(jié)果陰性，但不能排除HIV感染；HIV核酸檢測陽性，可作為診斷HIV感染的輔助指標，不能單獨用于HIV感染的診斷，報告定性檢測結(jié)果時還應(yīng)注明反應(yīng)條件和所使用的引物序列。報告HIV核酸定量檢測結(jié)果時應(yīng)按照儀器讀數(shù)報告結(jié)果，注明使用的試驗方法、樣品種類和樣品量，當測定結(jié)果小于zui低檢測*，應(yīng)注明zui低檢測限水平，低于zui低檢測限的結(jié)果不能排除HIV感染。biomiga分子生物試劉盒
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