胰蛋白酶分散技術(shù)
胰蛋白酶（簡稱胰酶）是廣泛應(yīng)用的消化劑。胰蛋白酶是一種胰臟制品，對(duì)蛋白質(zhì)有水介作用，主要作用于賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵，使細(xì)胞間質(zhì)中的蛋白質(zhì)水介而使細(xì)胞分散開，在常用的蛋白酶中由于產(chǎn)品的活力和純度不同，對(duì)細(xì)胞的消化能力也不同，胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞的作用，取決于細(xì)胞類型、酶的活力、配制的濃度、消化的溫度、無機(jī)鹽離子、pH以及消化時(shí)間的長短等。
?、偌?xì)胞類型 胰蛋白酶適于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織,能有效地分離肝、腎、甲狀腺、羊膜、胚胎組織、上皮組織等。而對(duì)含結(jié)締組織較豐富的組織,如 乳腺、滑膜、子宮、纖維肉瘤、腫瘤組織等就無效，但若與膠原酶合用,就能增加其對(duì)組織的分離作用。
?、诿傅幕盍?市售的胰蛋白酶,其活力都經(jīng)過測定而有效，但配制時(shí)必須新鮮，需保存在低溫冰箱中，消化時(shí)的pH和溫度都要適宜，否則會(huì)影響活力，細(xì)胞的分散直接與酶的活力有關(guān)，zui終使用活力為1:200或1:250，56℃pH8.0時(shí)活力zui強(qiáng)。
該酶為粉劑，保藏時(shí)要防潮，室內(nèi)溫度不宜過高，保存時(shí)間不能太長，若粉劑結(jié)團(tuán)塊,說明該部分受潮或失效。
?、勖傅臐舛?胰蛋白酶一般采用的濃度為0.1%~0.25%（活力1:200或1:250）,但遇到難消化的組織時(shí)，濃度可適當(dāng)提高，消化時(shí)間適當(dāng)延長。濃度高對(duì)細(xì)胞有毒性，而較低濃度的胰蛋白酶在培養(yǎng)液中可促進(jìn)細(xì)胞的增殖，若培養(yǎng)液中加入血清，其少量胰蛋白酶可被血清中抗胰蛋白酶因子所清除。
?、軠囟?一般認(rèn)為胰蛋白酶在56℃時(shí)活性zui強(qiáng)，但由于對(duì)細(xì)胞有損害而不能被采用，常使用的溫度為37℃，通常在37℃進(jìn)行消化比室溫作用快。
?、輕H pH8~pH9是胰蛋白酶活力適宜范圍，但隨堿性的增加其活力也隨之減少，活性強(qiáng)分散快，細(xì)胞也容易被消化下來，消化分離細(xì)胞時(shí)PH只能選用7.6~8.0之間，否則對(duì)細(xì)胞有損傷。
?、逕o機(jī)鹽離子 若用含有鈣和鎂的鹽類溶液來配制胰蛋白酶時(shí)，可以發(fā)生抑制胰蛋白的消化作用。因此,在配制時(shí)應(yīng)采用無鈣鎂離子的PBS配制。
?、呦瘯r(shí)間 如果細(xì)胞消化時(shí)間過長，可以損害細(xì)胞的呼吸酶，從而影響細(xì)胞的代謝，一般消化時(shí)間為20min為宜，冷消化時(shí)使用低濃度消化液，于4℃過夜也可。
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