牛上皮細胞抗菌肽的分離純化
牛抗菌肽共有13種，主要包括[5-6]牛β-防御素上皮抗菌肽、舌抗菌肽、腸上皮細胞抗菌肽，即腸肽素及牛肽聚糖識別蛋白） Diamond G等[7]從牛氣管黏膜分離得到TAP，它是從哺乳動物上皮細胞分離純化得到的*個抗菌肽，TAP的發(fā)現(xiàn)為其他的哺乳動物上皮細胞抗菌肽的發(fā)現(xiàn)奠定了堅實的基礎。Tarver A P等[8]從牛小腸分離純化得到牛腸肽素，其方法為采集牛小腸，液氮凍存，－70 ℃保存?zhèn)溆谩?br />
粗提制備：剪碎，研磨，勻漿，用100 mL/L乙酸過夜攪拌浸提，過濾，液體用1 mol/L硫酸銨沉淀，離心，上清液濃縮即得粗提。純化采用3步色譜技術，*步凝膠過濾色譜，生物凝膠P-30，排阻極限40 ku），2. 0 cm×30 cm 的柱子，用50 mmol/L的乙酸銨（pH 4.1）平衡、2.5 mL/min流速洗脫，收集、冷凍干燥并做抑菌試驗。
有活性部分進行陽離子交換色譜，用330 g/L KH2PO4溶液平衡，0 mol/L～1 mol/L的NaCl線性梯度洗脫，收集冷凍干燥。將有抗菌活性的部分進行第三步分離純化，反相高壓液相色譜，0.46 cm×22 cm C18反相柱，平衡1 mL/L三氟乙酸（TFA）水溶液，洗脫1 g/L TFA/乙腈，乙腈梯度0 mL/L～850 mL/L，洗脫速度1 mL/min，收集進行活性檢測、分子量鑒定及序列測定?！ ?br />
Aono S等[9]從牛乳腺上皮細胞克隆到一種新的牛β-防御素，并進行真核細胞表達。重組表達蛋白用CM Macro-Prep樹脂進行純化，純化抗菌肽進行質譜分析，氨基酸測序。BPGRPs的純化則先將粗提產物采用10 cm× 25 cm C18 catridge進行濃縮，再用RP-HPLC進行純化，平衡1 mL/L TFA水溶液，洗脫1 mL/L TFA/乙腈，乙腈梯度0 mL/L～420 mL/L[10]。
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