用中性粒細(xì)胞分離液提取中性粒細(xì)胞過程
銷售直線:021-31322331、一、實(shí)驗(yàn)所需材料:
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1、中性粒細(xì)胞分離液(histopaque)
2、全血
3、Hanks液
4、離心管若干
5、離心機(jī)
6、移液管,移液搶
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 將所有試劑放至室溫。
2、用離心管收集全血1-2ml
3、加等體積的Hanks液至全血中組成
4、加2ml中性粒細(xì)胞分離液至裝至離心管中。
5、將全血和Hanks液加入分離液中
6、4℃,900r/min離心8-10min血液此時應(yīng)該分為6層:血漿、單核細(xì)胞層、分離液、中性粒細(xì)胞、其余的分離液、紅細(xì)胞沉淀層。如果分層不是很明顯,會導(dǎo)致分離的細(xì)胞不純,則需要重復(fù)分離。
7、用吸管小心地移去上面的三層(血漿、單核細(xì)胞和分離液)
8、小心地吸取中性粒細(xì)胞層和其下面的分離液層,轉(zhuǎn)移至一個干凈的離心管中。
9、加Hanks液3ml,后4℃,900r/min離心8-10min,棄上清,留沉淀,重復(fù)2次。
10、如果細(xì)胞用來提RNA,可加Trizol 1ml保存。
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