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組織單細胞懸液的制備方法

更新時間:2016-06-07      瀏覽次數:5375

組織單細胞懸液的制備方法

注:A.組織勻漿液需現用現配,配制方法為:20%標準胎牛血清(產品編號:TBD31HB

      與 80%F 液(產品編號:F2013TBD)混勻,備用。

   B.本試劑盒中不包含膠原酶,若采用酶消化法制備單細胞懸液,請用戶根據各實驗室要求另購不同類型膠原酶。

1.剪碎法:

1 將組織塊放入平皿后,加入少量組織勻漿液;用眼科剪將組織剪至勻漿狀,加入 5ml

      組織勻漿液。

2) 用吸管吸取組織勻漿,用 200 目不銹鋼濾網(另購)過濾到離心管內。

3) 沉淀以 450-500g 離心 15 分鐘,棄上清。

4 用含 80%標準胎牛血清(產品編號:TBD31HB)的樣本稀釋液(產品編號:2010C1119),       懸浮沉淀成細胞濃度為 2×108–1×109/ml 的單細胞懸液備用。

2.勻漿器法

1 用眼科剪將組織剪成小塊;放入 70ml 組織研磨器內,加入 2ml 組織勻漿液;緩慢轉動研         棒,研磨至勻漿。

2 5ml 組織勻漿液沖洗研器;收集細胞懸液,經 200 目不銹鋼濾網(另購)過濾到離心管         內。

3 沉淀以 450-500g 離心 15 分鐘,棄上清。

4 用含 80% 標準胎牛血清(產品編號: TBD31HB )的樣本稀釋液(產品編                 號:2010C1119),懸浮沉淀成細胞濃度為 2×108–1×109/ml 的單細胞懸液備用。

3.酶消化法:

1) 用 F 液(產品編號:F2013TBD)將膠原酶稀釋,終濃度為 400U/ml,至于冰浴備用。

2) 取一適當大小培養皿進行操作:用鑷子夾碎動物脾臟,加入稀釋后的膠原酶,37

      消化 20 分鐘。

3) 以 200 目不銹鋼濾網(另購)過濾到離心管內。

4) 沉淀以 450-500g 離心 15 分鐘,棄上清。

5 用含 80% 標準胎牛血清(產品編號: TBD31HB )的樣本稀釋液(產品編                 號:2010C1119),懸浮沉淀成細胞濃度為 2×108–1×109/ml 的單細胞懸液備用。

 

 

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