淋巴細(xì)胞分離液使用過(guò)程問(wèn)題解答
問(wèn)題1.淋巴細(xì)胞分離液的溫度對(duì)于分離的影響有多大，有無(wú)做過(guò)不同室溫溫度及不同液體溫度下的分離效果驗(yàn)證？
淋巴細(xì)胞分離液由于配制時(shí)的環(huán)境溫度即為20℃±2℃，保證該溫度下分離液密度為1.077±0.001g/mL，分離液的作用原理：密度梯度分離，分離成功的關(guān)鍵即為正確的密度保證。溫度和密度緊密，高溫度下，分離液低密度；低溫度下，分離液高密度，因此建議使用時(shí)，樣品和分離液的溫度均應(yīng)為18℃-22℃之間。
建議： 使用時(shí)，環(huán)境、樣品及分離液的溫度控制均應(yīng)在20℃±2℃
問(wèn)題2.如何更好的提高血液分離效率，那些因素會(huì)導(dǎo)致提取效率過(guò)低？
影響因素：
ü樣本新鮮程度：*分離時(shí)間為2h以內(nèi)
ü血液稀釋比例
ü所使用離心管直徑高度：分離液和樣本量在管中的高度不得超過(guò)管體積的2/3
ü分離液與樣本的比例：分離液至少得和上樣樣本體積一致，分離液越多越好
ü血液個(gè)體差異問(wèn)題
ü血液及分離液都不要經(jīng)過(guò)冷藏及冷凍，且使用時(shí)的溫度在18℃-22℃之間
離心力及離心時(shí)間
問(wèn)題3.每個(gè)客戶的離心機(jī)不同，是否可以使用統(tǒng)一的離心力提取細(xì)胞?如果使用統(tǒng)一的離心力提取淋巴細(xì)胞效果如何？
因?yàn)檠簜€(gè)體差異粘稠度、采血時(shí)間、血液量等，根據(jù)不同的因素來(lái)進(jìn)行調(diào)整。可以統(tǒng)一離心力，但需根據(jù)個(gè)體差異略有改動(dòng)。
問(wèn)題4.有一些的離心機(jī)有升速降速速率調(diào)節(jié)，如何來(lái)設(shè)定升速降速速率以保證能得到數(shù)量及純度較高的PBMC（舉例）？有一些普通的離心機(jī)沒(méi)有升降速速率調(diào)節(jié)，PBMC層就就形成得不好，如何解決此類問(wèn)題？
建議升速為1min，降速為3min分離效果理想。升降速時(shí)間不包含在離心時(shí)間里。
問(wèn)題5.說(shuō)明書(shū)上是針對(duì)骨髓、臍帶血、外周血標(biāo)本，我們?cè)谑褂眠^(guò)程中還會(huì)遇到胸腹水、心包積液等體液標(biāo)本，那對(duì)這類標(biāo)本的分離沒(méi)有特殊分離要求？
除血液樣本以外，其他來(lái)源樣本首先要富集樣本中的細(xì)胞，要求細(xì)胞懸液濃度控制在2×108-1×109個(gè)/ml，效果*。
問(wèn)題6.有一些標(biāo)本本身淋巴細(xì)胞百分比就比較低，如何盡可能的提高得率或是有無(wú)方法去除掉一些其他不要的細(xì)胞？
要選擇合適的試管、樣本要2h以內(nèi)進(jìn)行分離，分離液使用量要多余樣本量，以及離心力、離心時(shí)間、溫度要合適等。
根據(jù)樣本量制定的實(shí)驗(yàn)方案:
樣本量 | 稀釋情況 | 選用耗材 | 分離液用量 | 離心力 | 離心時(shí)間 |
2-3mL | 1:1稀釋 | 15mL離心管 | 1:1 | 400g | 15min |
4-6mL | 無(wú)需稀釋 | 50mL離心管 | 1:1 | 400g | 15min |
6-8mL | 無(wú)需稀釋 | 50mL離心管 | 1:1 | 400g | 20min |
建議：分離液用量1:1是指與上樣量1:1
