通用型細(xì)胞分離液操作說明
通用型細(xì)胞分離液操作說明和使用保存中的注意事項(xiàng):(各種動物)
本品為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是葡聚糖與泛影酸葡甲胺。適用于從血液
及組織勻漿中(小牛血清懸起勻漿的細(xì)胞 1X107/ml)分離所需細(xì)胞,在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物中廣泛
應(yīng)用。
其他人及動物多種比重細(xì)胞分離液。注:因不同種屬不同比重分離液的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞
帶電不同,所以用戶在定制分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重、動物的種屬及被分離細(xì)胞的名稱。
使用方法
例:取新鮮抗凝血1ml,與Hank’s 液1:1 混勻后,小心加于2ml 的細(xì)胞分離液之液面上,以1500
轉(zhuǎn)/分離心(半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子)1 分鐘,注:調(diào)整離心速度和時間,以下細(xì)胞分層可為不同細(xì)胞
分層,收集所需細(xì)胞層即可,離心管中由上至下細(xì)胞分四層。*層;為血漿或組織勻漿液層。
第二層;為環(huán)狀乳白色細(xì)胞層。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細(xì)胞層(此紅細(xì)胞層,
表面有懸起的部分白細(xì)胞層收集此層細(xì)胞即為白細(xì)胞。收集第二層的細(xì)胞(粒細(xì)胞和單核細(xì)胞),
放入含 Hank’s 液15 毫升的試管中,充分混勻后,以1500-2000 轉(zhuǎn)/分離心10 分鐘。吸去上清液,
沉淀經(jīng)反復(fù)洗2 次。用Hank’s 液或小牛血清重新懸起沉淀的細(xì)胞(1X107/ml)用相應(yīng)動物的單
核細(xì)胞分離液去除或收集單核細(xì)胞備用。(參照淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞分離方法)其余即為粒細(xì)胞,
收集備用。
注意事項(xiàng)
1. 啟封后應(yīng)置4℃保存避免微生物的污染。 2. 細(xì)胞分離液從冰箱取出后,不可立即使用,需待
溶液溫度升至室溫時,搖勻后使用。 3. 整個分離過程中,溫度應(yīng)控制在18-28℃且在無菌環(huán)境
下,避免微生物的污染,否則會影響分離質(zhì)量。
應(yīng) 用
-從動物血液及組織中分離淋巴細(xì)胞
特點(diǎn)
-密度變化率依照Ficoll 400,泛影酸和氫氧化鈉. -*分離溶液的密度為參照具體產(chǎn)品的標(biāo)簽
-生理學(xué)參數(shù)-在低粘度時高密度-無菌-即用型-溶液
產(chǎn)品規(guī)格
溶液 水
PH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nèi)毒素 <5EU/ml
無菌 已檢測
保存期限 2 年
貯藏 +18℃-+25℃
注 意
TBD 實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞分離培養(yǎng)基是敏光型的。這種培養(yǎng)基在運(yùn)輸和貯藏過程中應(yīng)避光保溫。由于
各品牌離心機(jī)的性能不同,國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以
調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù),調(diào)節(jié)離心的時間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定)。組織,
血液,細(xì)胞要求新鮮,避免冷凍和冷藏。
貯 藏
18-25℃避光保存。啟封后置4℃保存。本品為真空包裝,未啟封前置于10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)
晶,影響分離效果。
通用型細(xì)胞分離液的比重調(diào)整:
制備幾種不同的細(xì)胞分層液:40%、42.5%、45%、47.5% 、50%、52.5%、55%、57.5% 、60%、
62.5% 、65%、67.5%、70%、75%、80%
(0.1mol PBS PH:7.2 稀釋配制)
40% LTS113分離液比重約為 : 1.0550
42.5% LTS113分離液比重約為 : 1.0580
45% LTS113分離液比重約為 : 1.0610
47.5% LTS113分離液比重約為 : 1.0650
50% LTS113分離液比重約為 : 1.0670
52.5% LTS113分離液比重約為 : 1.0700
55% LTS113分離液比重約為 : 1.0730
57.5% LTS113分離液比重約為 : 1.0760
60% LTS113分離液比重約為 : 1.0780
62.5% LTS113分離液比重約為 : 1.0800
65% LTS113分離液比重約為: 1.0830
67.5% LTS113分離液比重約為: 1.0850
70% LTS113分離液比重約為 : 1.0875
75% LTS113分離液比重約為 : 1.0920
80% LTS113分離液比重約為 : 1.1000
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