標(biāo)記鬼筆環(huán)肽在觀察細(xì)胞骨架時(shí)的運(yùn)用
鬼筆環(huán)肽（phalloidin 鬼筆鵝膏素）
從一種毒性菇類中分離的劇毒生物堿，C35H48N8O11S。無(wú)色，細(xì)針狀結(jié)晶，系從毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中得到的有毒的環(huán)狀七肽。與鵝膏蕈堿（amanitin）一起存在，毒性比鵝膏蕈堿弱，對(duì)小鼠的致死劑量是50微克，對(duì)人體也有很強(qiáng)的毒性，可引起流涎、嘔吐、便血、發(fā)紺、痙攣、肌肉攣縮，以致死亡。它同細(xì)胞松弛素Ｂ的作用相反, 只與聚合的微絲結(jié)合, 而不與肌動(dòng)蛋白單體分子結(jié)合。它同聚合的微絲結(jié)合后, 抑制了微絲的解體, 因而破壞了微絲的聚合和解聚的動(dòng)態(tài)平衡。鬼筆環(huán)肽可以與聚合的微絲結(jié)合的特殊性質(zhì)使得它具有一個(gè)頗富前景的用途：通過(guò)讓這種毒素吸附于熒光染料上面，研究人員可以研究細(xì)胞的內(nèi)部工作機(jī)制，窺視細(xì)胞如何分裂。通過(guò)這些觀察，他們可以揭開(kāi)癌癥工作機(jī)制和組織生長(zhǎng)之謎。
美國(guó)加州大學(xué)圣克魯斯分校的兩位化學(xué)家斯科特·洛基和勞拉·舒利斯科（Laura Schuresko）利用一種稱為固體階段合成（solid-phase synthesis）的手法，制造出這種致命物質(zhì)。他們不是將幾種化學(xué)物質(zhì)放入燒瓶混合，讓它們自由飄浮，而是在化學(xué)反應(yīng)期間對(duì)其中一種化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行適當(dāng)約束，這樣一來(lái)，研究人員在復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中可以更好地對(duì)其進(jìn)行控制。
FITC和Rhodamin等熒光物質(zhì)標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽可特異的與真核細(xì)胞的F-acting結(jié)合，從而顯示微絲骨架在細(xì)胞中的分布。鬼筆環(huán)肽的配制：0.1mg鬼筆環(huán)肽溶于1ml無(wú)水甲醇（也可用DMSO或無(wú)水乙醇溶解）配成貯存液，可在-20度避光的條件下長(zhǎng)期保存，工作液的濃度為5ug/ml，由貯存液加生理鹽水PBS稀釋20倍即可。
染色程序：
生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次，每次10分鐘；
3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分鐘，生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次；
加入5ug/ml的FITC-鬼筆環(huán)肽室溫染色30-60分鐘，夏季時(shí)間可以短一些，生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次；
DAPI或hoechst33258染細(xì)胞核10分鐘，生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次；
吸去多余水分，加熒光封片液（中性或偏堿性緩沖液加等量甘油），蓋上蓋玻片，熒光或共聚焦顯微鏡下觀察。
注意事項(xiàng)：
鬼筆環(huán)肽的分子量小，很容易通過(guò)細(xì)胞，不需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行冷丙酮和TRITON X-100處理。
藥品價(jià)格昂貴，0.1mg的售價(jià)接近兩千元，要節(jié)約使用。
毒性較大，戴上手套操作。
