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淋巴細胞分離液-人

更新時間:2010-12-24      瀏覽次數:1043
SC1077   100 ml   200 元

概述:聚蔗糖商品名為Ficoll 400,泛影葡胺是臨床使用的造影劑。二者組成的淋巴細胞分離液(Lymphocyte Separation Medium)具有低粘度、低滲透壓、無毒等特點,因而在過去幾十年里一直是分離血液單個核細胞(包括淋巴細胞和單核粒細胞)的標準操作方法。分離時將淋巴細胞分離液置試管底層,上面鋪加抗凝全血,兩者形成一個清晰的界面。室溫水平低速離心后出現幾個不同層次的液體和細胞帶。紅細胞和多核粒細胞密度大于分層液而沉積于管底。血小板和單個核細胞與分層液密度相當,在血漿層和分離液的界面形成白膜狀條帶,吸取該層細胞洗滌去除血小板得到純凈的單個核細胞。其中單核粒細胞純度~95%,淋巴細胞純度90~95%,得率約80%以上其高低與室溫有關,分離溫度低于10oC或超過25oC會降低細胞得率。

人與不同動物血中單個核細胞對
細胞分離液的密度要求各不相同。我們提供兩種密度的淋巴細胞分離液:淋巴細胞分離液Lymphocyte Separation Medium (Human),用于分離人血液單個核細胞/淋巴細胞。淋巴細胞分離液Lymphocyte Separation Medium (Animal),用于分離小鼠、大鼠、豚鼠、兔、雞、貓、牛的血液單個核細胞/細胞分離液。

產品信息:
100 ml
細胞分離液-人 Lymphocyte Separation Medium (Human),目錄號SC1077,用于分離人血;
100 ml 淋巴細胞分離液-動物 Lymphocyte Separation Medium (Animal),目錄號SC1083,用于分離動物血;
均含Ficoll-400和泛影葡胺,pH8.0。高溫除菌。避光2-8 oC穩定2年。

操作方法:
1. 取新鮮血液,用肝素或枸櫞酸鈉或EDTA抗凝?;蛘?,取血后靜置自然沉降1h,取上層血漿及交界面的細胞。
2. 用等體積PBS或0.9% NaCl稀釋血液或血漿。1:1稀釋血液可降低紅細胞的凝聚,提高淋巴細胞收獲量。
3. 取3 ml淋巴細胞分離液加入離心管管底,并升溫到室溫。
4. 用巴斯德玻璃吸管吸取6 ml稀釋后的血液樣品,或者取3 ml未抗凝全血或未稀釋血漿,延管壁緩慢鋪到淋巴細胞分離液上面,勿打亂液層界面。
5. 水平轉子離心2000 rpm/min或700g離心20 min,室溫約20 oC。存放2h以上的血液應離心30 min。
6. 離心后管底是紅細胞,中間層是分離液,zui上層是血漿。血漿層與分離液之間是一薄層較致密的白膜,含單個核細胞(包括淋巴細胞和單核粒細胞)。推薦用吸管直接插入到單個核細胞層并吸取該層,放入另一試管中。
7. 加10 ml生理鹽水稀釋分離的淋巴細胞,250g離心10 min,棄上清。重復洗滌1-2次,除去血小板和抗凝物質。zui后用PBS或合適的培養基將淋巴細胞稀釋備用。

注意事項:
1. 為保持淋巴細胞的活性,應該采血后馬上進行分離。分離的細胞層實際上是單個核細胞層,包括淋巴細胞和單核細胞。
2. 小動物如小鼠大鼠可斷頭取血,抗凝,用PBS 1:1稀釋血液增加回收率。分離時按照比例,每一份淋巴細胞分離液加兩份稀釋后的血液。如果操作無誤但離心后的界面之間不能形成單個核細胞層,可能是血液量不足,或未使用新鮮血液,或者不適于分離該種動物血液。 相關信息:
透析袋,細胞分離液,抗體,細胞因子,fermentas,
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